Todo o material utilizado neste atlas, seja ele visualizado através
de microscopiade luz ou eletrônica, teve que ser fixado logo após
a sua obtenção. O processo de fixação varia
um pouco, dependendo do propósito e do equipamento a ser usado para
a análise, mas de maneira geral, o material visualizado em
microscopia de luz é fixado em solução
de formaldeído a 10% em solução tamponante. Já
o material observado em microscopia eletrônica é fixado em
Glutaraldeído a 2,5% e paraformaldeído a 4% também
em solução tamponante. O material foi mantido nestas soluções
por períodos que variavam de 1 a 24 horas à 4 0C.
Após
o processo de lavagem, desidratação e inclusão em
resina, (que também varia se a preparação for para
a visualização em microscopia de luz ou eletrônica
de transmissão) o material é cortado. Na microscopia de luz,
utiliza-se um aparelho conhecido como micrótomo e são obtidos
cortes com espessura variável, em torno de alguns micrômetros
(6-10mm).
Depois
do processo de microtomia, o material destinado a microscopia de luz é,
após ser colhetado em uma lâmina, desparafinizado e corado.
Diversas colorações foram utilizadas no preparo deste Atlas.
A coloração mais usada nos estudos Histológicos é
a Hematoxilina & Eosina, conhecida como H&E. Nesta coloração,
o núcleo celular cora-se normalmente em roxo pela Hematoxilina e
o citoplasma em rosa pela Eosina.
Após um período
de secagem a lâmina deve ser montada. Sobre o corte se deposita uma
gota de bálsamo e posteriormente a lamínula. A lâmina
assim, está pronta para ser observada em microscópio
de luz.
O
material a ser observado na microscopia eletrônica de transmissão(MET)
também deve ser cortado. O aparelho onde se realiza este trabalho
é conhecido como Ultramicrótomo. Os cortes realizados pelo
ultramicrótomo são de algumas dezenas de nanômetros
(1nm= 10-3mm) para que possam ser
atravessados pelo feixe eletrônico e observados ao MET. O material
cortado pelo ultramicrótomo é colhetado em pequeníssimas
grades e deve ser contrastado antes de ser observado. Para este fim, utilizam-se
substâncias contendo metais de grande número atômico
como chumbo, urânio e ósmio.